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生物知識

MSC Xeno-Free SFM間充質干細胞無血清培養常見問題

作者:admin 來源:本站 發布時間: 2020-03-03 21:18  瀏覽次數:
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 1.Corning MSC Xeno-Free SFM 的特點是什么?

Corning MSC Xeno-Free SFM  是一種化學成分限定的無任何動物源性蛋白的培養基,可支持不同來源(脂肪,骨髓,臍帶等)的人間充質干細胞培養和擴增,并可以保持干細胞的分化能力,不需要對培養容器進行預包被即可在普通培養瓶中支持間充質干細胞的長期培養,且可以維持其分化能力。
 
2.使用前培養瓶需要包被嗎?
不需要,培養基中添加的促進細胞貼壁組分,可以促使細胞在普通組織處理表面(TCT)良好貼壁, 同時推薦使用Corning 獨有的CellBIND 培養表面(T-25 flask, Corning # 3289), 可使間充質干細胞貼壁更好, 產量更高。
 
3.培養基使用是否要需要加入添加劑或抗生素?
該培養基為即用型完全培養基,不需要添加任何額外試劑。在細胞培養過程中可以添加抗生素來防止細菌污染,但是細胞治療應用,添加抗生素會有致敏的風險。
 
4.培養基的運輸和存儲條件是什么?
培養基中添加了各種生長因子,所以在存儲和運輸過程中需要冷凍(<-20℃)保存, 培養基在使用前于4℃或室溫融化,融化后建議4℃保存并于3-4周內用完;每次使用前室溫平衡30min再使用;盡量避免培養基反復凍融,如用量不大,可將培養基分裝存儲于-20℃,可反復凍融1次使用。
 
5.建議細胞的接種密度是多少?
建議細胞的接種密度為5000 cells/cm²,如果是新復蘇細胞或第一次使用該培養基培養,建議細胞接種密度為10000 cells/cm².
 
6.是否可以用來做間充質干細胞的原代分離培養?
否,該培養基是專為間充質干細胞的擴增培養所設計,可支持不同來源間充質干細胞的長期培養, 不能用于原代MSC 分離。
 
7.MSC 培養過程中如何傳代?
根據細胞接種密度和生長狀態,當細胞的融合度達到80%左右時,可進行細胞傳代,棄去培養基, 適量PBS(0.2ml/cm2)潤洗后棄去,加入適量商業化的胰酶替代物(Corning #  25-058-CL)消化, 顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕搖晃培養瓶并吹打,使所有細胞解離表面,加適量PBS 稀釋胰酶替代物,離心1000rpm,5min 收獲細胞。(如果使用胰酶消化, 需要離心盡量去除胰酶,減少殘留)。
 
8.為什么細胞融合度不可超過90%?
細胞生長過密,會出現接觸抑制,繼而細胞活性會受到影響,導致后續傳代細胞生長緩慢或擴增倍數較低;并且產生接觸抑制后MSC 細胞容易分化。
 
9.為什么Corning CellBIND 表面會提高間充質干細胞的收獲量
Corning CellBIND 表面利用獨有的表面處理技術,增加了細胞培養表面親水的持久性與細胞吸附的穩定性,可以更好的支持貼壁細胞的培養,特別針對MSC 細胞,與Corning Xeno-Free SFM  聯合使用,可有效提高細胞的收獲量30%。
 
10.為什么不同來源的間充質干細胞培養時會有差異?
間充質干細胞屬于原代細胞,會受到供體差異,組織來源差異及傳代次數的影響,細胞在培養過程中會出現較大的差異。 Corning® MSC Xeno-Free SFM可支持脂肪、臍帶和骨髓來源的間充質干細胞生長,細胞形態與間充質干細胞表面標志物表達正常,并且擴增倍數和穩定性整體表現良好。
 
11.該培養基是否可以培養其他動物來源的間充質干細胞?
該培養基專為人間充質干細胞培養擴增設計,目前不能應用于除人外其他動物來源的間充質干細。
 
12.該培養基為沒有酚紅作為指示劑,其換液頻率是什么?
間充質干細胞培養過程中的換液頻率取決于細胞培養狀態和細胞接種密度,一般為3-4天進行換液,按照我們培養經驗,接種密度為5000 cells/cm2, 可培養4天換液或傳代,接種密度為10000 cells/cm2, 可培養3天換液或傳代。
 
 
 
 
Corning® MSC Xeno-Free SFM 間充質干細胞無血清培養基
 

 

 

  Corning® MSC Xeno-Free SFM特點

成分明確,不包含血清及其他任何人源以外成分

使用方便,無需額外添加物

運輸及存儲溫度單一(-20℃)

無需包被,直接培養

可支持不同來源間充質干細胞生長,包括:

  脂肪來源間充質干細胞 ADSC

  臍帶來源間充質干細胞  UC-MSC

  骨髓來源間充質干細胞BM-MSC

 

 

 

產品訂購信息

貨號               產品名稱                                  體積                   包裝

 

88-600-CV     Corning 間充質干細胞無血清培養基                           500 毫升                  

 

 

使用Corning® MSC Xeno-Free SFM培養基進行MSC的擴增

Corning® MSC Xeno-Free SFM置于4℃冰箱至完全融化。

注意:不要將Corning® MSC Xeno-Free SFM反復凍融。為了不影響使用效果,4解凍后,建議在一個月內使用完。

 

將凍存復蘇或原代分離的間充質干細胞利用Corning® MSC Xeno-Free SFM培養基直接接種于細胞培養瓶中(TCT 或者 CellBIND表面處理均可)。

 

待細胞生長鋪滿(融合度約80-90%),移除培養基。PBS清洗,用0.25%胰蛋白酶消化3-5min。培養基終止,300g  x  5  min離心獲得細胞沉淀。新培養基重懸細胞沉淀,5000-10000/cm2接種于新的培養器皿中。培養基用量依據細胞培養器皿底面積,下表可供參考。

注意:細胞接種密度可依據實驗計劃、不同細胞類型及供體調整。

 

Vessel

Surface Area (cm2)

Medium volume (mL)

T25 flask

25

5

T75 flask

75

15

T175 flask

175

35-50

CellSTACK

636 (1 chamber)

150

HYPERflask

1720

570

待細胞長滿后,細胞可收獲用于下游實驗或凍存。

 


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貨號

產品名稱

Qty/Pk

Qty/Cs

21-040-CV

PBS緩沖液

6

1

25-051-CI

0.05% Trypsin

6

6

430639

組織培養表面處理T-25 flask

20

200

3289

CellBIND®表面處理 T-25 flask

20

200

10024

HYPERflask

4

24

3313

CellSTACK 5-chamber, TCT

1

8

3311

CellSTACK 5-chamber, CellBIND

1

2

 

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